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动物性食品中氯霉素残留量检测方法简化及分析

食品安全 时间:2018-12-02 11:03:42 来源:食品安全导刊 作者:扎西穷达 央拉

摘 要:连续两年在市场、餐饮业随机抽取150份动物性食品进行氯霉素检测,采用高效液相色谱串联三重四极杆质谱(LC-MS-MS)测定,比较与综合了检测方法GB/T 22338、农业部781号公告-2-2006及GB/T 20756。对操作步骤进行简化,同时提高检测时效,该方法的检出限为0.07μg/kg,线性范围为0.5~100ng/mL(r=0.99993),回收率达99%,相对标准偏差RSD为2.6%。两年内检测结果显示仍存在使用氯霉素现象,共有5批样品检测出氯霉素,不合格率达3.3%,为确保餐饮业中动物性食品的安全,需加强兽药残留的监管,抵制动物性食品中抗生素的滥用。

关键词:动物性食品 氯霉素 检测

1 引言

氯霉素能使白细胞减少,对人体造血系统的毒性极大,特别是会杀伤颗粒性白细胞,从而影响红细胞的成熟,并容易引起再生障碍性贫血症,可损害视力,引起急性中毒性表皮松懈症,使眼睑粘连及产生角膜瘢痕。此外,氯霉素对老年人、新生儿、早产儿以及肝肾功能不全人群的影响更大[1]。

随着经济生活水平的提高,人们对食品的质量要求也随之提高,并逐渐认识到抗生素饲料添加剂在经济效益的背后存在较大弊端。因此,大部分发达国家和地区禁用抗生素,而我国农业部公告第235号《动物性食品中兽药最高残留限量》附录4也规定氯霉素及其盐、酯(包括琥珀氯霉素)在所有动物性食品中是禁止使用的药物,并不得检出[2]。

2 实验

2.1 样品、仪器、标准品及试剂

2.1.1 样品:购置于市场,分别随机抽取畜禽生肉、水产品、蜂蜜共80批,餐饮业随机抽取熟肉加工制品70批。

2.1.2 仪器:高效液相色谱串联三重四极杆质谱LC-MS-MS(高效液相色谱,日本岛津公司;质谱,美国AB公司);色谱柱C18(4.6mm×150mm×5μm,美国安捷伦公司)。

2.1.3 标准品:标准品名称及来源,见表1。

2.1.4试剂:实验用水为二次蒸馏水;氯化钠、正己烷、乙腈为分析纯;甲醇、乙酸乙酯为色谱纯。

2.2仪器条件

2.2.1高效液相色谱条件

进样量:10μL;柱温:40℃;流速:0.8mL/min,流动相和梯度比例,见表2。

2.2.2质谱条件:

离子源:ESI;扫描方式:负离子扫描;检测方式:MRM。

2.3 对照品制备与样品处理

2.3.1 对照品制备

氯霉素标准工作液:准确量取标准溶液,用甲醇+水(3+7)稀释至刻度,制成浓度为100ng/mL的标准工作溶液。

氯霉素D-5标准工作液:准确量取内标溶液,用甲醇+水(3+7)稀释至刻度,制成浓度为100ng/mL的内标工作液。

标准曲线的制备:精密量取上述标准溶液工作液,用基质溶液稀释至1.0mL,制成氯霉素浓度分别为0.5、1.0、5.0、10.0、50.0和100ng/mL,氯霉素D-5内标浓度为20.0ng/mL,氯霉素浓度检出限浓度为0.5ng/mL。

2.3.2 样品处理

取试样5.0g置于50mL塑料离心管中,加氯霉素D-5内标工作液200μL,加入乙腈10mL和4%氯化钠溶液10mL,涡旋振荡30min提取。离心10min转速4500r/min,取上清液到新的50mL塑料离心管中。在新的塑料离心管中加正己烷5mL,涡旋振荡3min,4500r/min,离心5min,弃去正己烷液,反复几次直至去除样品中脂肪。加乙酸乙酯溶液6mL,涡旋振荡5min,4500r/min,离心5min,将乙酸乙酯层转移至15mL玻璃离心管中,经氮气吹干,加甲醇+水(3+7)1mL,涡旋5min使之溶解,于12000rpm下离心3min,经0.22μm滤膜过滤,取滤液进样测定。[3-5]

3 结果

3.1 质谱条件的优化

针筒直接进样质谱仪,用全扫描方式将氯霉素和D5-氯霉素的标准溶液注入离子源中,找到目标化合物的分子离子峰。进行二级质谱,扫描二级质谱图(图1)找到碎片离子信息,目标化合物的质谱参数CE电压、DP电压、EP电压等进行优化,达到质谱条件最佳。[6]

3.2 样品前处理优化

本实验选用正己烷去除样品中脂肪,乙酸乙酯提取样品中的氯霉素,进行涡旋和离心,氮气吹干。

3.3 标准曲线、检出限及回收率

用标准溶液溶解基质样品来制备标准曲线,绘制标准曲线进行定量,消除基质效应对结果的影响。得曲线方程y=3.44348e4 x±10951.42692,相关系数=0.99993,见图2。

本实验的样品称样以5.0g计,定容体积按1mL计,结合标准曲线氯霉素的检出限浓度为0.5ng/mL,仪器测试信噪比如图3所示,本实验检出限为0.07ug/kg。[7]

称取空白试样后同时分别加入0.03、0.1mL氯霉素标准工作液100ng/mL,各平行5份同样品处理,实际加入标准品的量为0.6、2.0?g/kg,计算见表4。

4 结论

4.1 方法简化

本实验简化了提取步骤,提高了检测效率;同时优化检测方法,达到最佳检测条件,得到结果为该方法的最低检出限为0.07ug/kg, 灵敏度得到提高,线性范围扩大,为0.5~100ng/mL(r=0.99993),回收率达99%,相对标准偏差RSD为2.6%。满足了对动物性食品氯霉素监督检测的要求,提高了检测时效。

4.2 检测数据结果分析

样品购置于市场,分别随机抽取畜禽生肉,其中牛肉20批、猪肉10批、鸡肉10批、水产品20批、蜂蜜及蜂产品20批,共80批;从餐饮业随机抽取熟肉加工制品共70批,其中牛肉加工制品20批、猪肉加工制品20批、鸡肉加工制品20批、鸭肉加工制品10批。检测结果显示,其中牛肉1批、鸡肉1批、蜂蜜1批、鸡肉加工制品2批检测出氯霉素残留量,共计5批样品不合格,不合格率达3.3%。从上述情况看,氯霉素残留量控制依旧是食品安全重大问题,检出率较高的为鸡肉类样品中氯霉素残留,禽类养殖业中使用氯霉素较为广泛,其他类产品也存在含有氯霉素残留,因此应从源头加强畜禽等养殖业中兽药使用监管,同时在企业生产和餐饮业加工中应注重加工原料的把关。[8]

参考文献

[1] 熊琳,李维红等,肉制品中药物残留风险因子概述[J].食品安全质量检测学报,2016年4月第7卷第4期:1572-1577.

[2] 农业部235号公告-2002,动物性食品中兽药最高残留限量[S].

[3] 农业部781号公告-2-2006,动物源食品中氯霉素残留量的测定高效液相色谱-串联质谱法[S].

[4] GB/T 22338-2008,动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定[S].

[5] SN/T 1864-2008,进出口动物源性食品中氯霉素残留量的检测方法液相色谱-串联质谱法[S].

[6] 馬晓年等,超高效液相色谱串联三重四极杆质谱测定蜂蜜中氯霉素残留[J].食品安全质量检测学报,2017年10月第8卷第10期:3898-3902.

[7] 张厚森等,高效液相色谱-串联质谱测定熟肉制品中磺胺嘧啶和氯霉素药物残留[J].分析科学学报,2013年8月第29卷第4期:527-530.

[8] 勇艳华等,熟肉制品中氯霉素的监测与分析[J].粮食加工,2010年09期:154-155.